RESUMEN:
La nitrato reductasa (NR) es la primer enzima en el metabolismo del nitrógeno en organismos eucarióticos, con un papel clave en la conversión a amonio y regulación de la adquisición de nitrato. Catalizando la reacción de N03 a N02. La NR se encuentra presente en hongos, algas, plantas y bacterias como Escherichia coli (E. coli): La Nar de E. coli está constituida por 3 subunidades: alfa, beta y gama. En algunos organismos participa en la respiración anaerobia o como fuente de energía, para funciones vitales y de crecimiento. La Entamoeba histolytica (E. histolytica) que carece de mitocondria y además obtiene su energía de otras fuentes, y una de estás, pudiera ser a través de la actividad de la Nar.
El objetivo principal de este trabajo fue demostrar la presencia de una proteína con actividad de Nar en los trofozoítos de E. histolytica. La estrategia experimental consistió en establecer por técnicas de biología molecular RT-PCR, inmunodetección y ensayos bioquímicos la presencia de una proteína con actividad de Nar.
Los resultados demostraron que existe la presencia de una proteína con 3 subunidades con actividad de Nar en los trofozoítos de E. histolytica y la inmunodetección la presencia de 4 proteínas reconocidas por anticuerpos anti-Nar. Además, participa en la reducción de N03 a N02 La actividad de la proteína amibiana fue inhibida por azida de sodio y tungsteno.
En conclusión, los resultados obtenidos demostraron por primera vez que los trofozoítos de E. histolytica presentan actividad de Nar. Y que esta sea la responsable de proveer de energía a este organismo para su sobrevivencia.
ABSTRACT:
Nitrate reductase (NR) is a central enzyme in nitrogen metabolism in eukaryotes with key roles in nitrate conversion to ammonium and regulation of NR acquisition. NR catalyzes NAD(P)H reduction of nitrate to nitrite. The enzyme is present in plants, algae, fungi and some bacteria as Escherichia coli (E. coli). The E. coli nitrate reductase (Nar) consists of 3 subunits: alpha, beta and gamma. In some species, this enzyme participates in the anaerobic respiration in order to obtain energy, necessary to life and growth. E. histolytica lacks mitochondria and must obtain energy from other sources; one possibility is through Nar activity. The aim of this work was to demonstrate the presence of the protein with activity of Nar in trophozoites of E. histolytica.
The experimental strategy consisted to establish by using molecular biology (RT- PCR) and immunodetection, biochemical assays procedures the presence of the protein with activity Nar in E. histolytica.
The results from RT-PCR studies shown the presence of 3 subunits, and immunodetection shown the presence of 4 proteins recognized by antibodies anti-Nar.
Additionally, E. histolytica was capable to transform nitrates to nitrites. And could participate in the transformation of nitrites from nitrates. The activity the protein was inhibit for sodium azide and tungstate. In conclusion, our results demonstrated for the first time, the presence of the protein with activity Nar in the trophozoites of E. histolytica, one possibility from obtain energy to survive.
