Producción de un nanocuerpo quimérico contra el virus del papiloma humano en E.coli y su purificación

Abstract

RESUMEN: Más del 99% de tumores cervicales son ocasionados debido al DNA del Virus del Papiloma Humano (HPV), pero existen otros tumores relacionados con este virus, así que se estima que el HPV es el responsable de causar el 5.2% de todos los cánceres. El diagnóstico rápido y tratamientos para tratar las infecciones por el HPV son importantes, es por ello que varios métodos han sido empleados para resolver la inmunogenicidad de anticuerpos que eligen como blanco los serotipos del HPV. Los nanocuerpos® (VHH) son las biomoléculas anticuerpo derivadas más pequeñas en dimensiones en el rango de nanómetros (15-60 kDa), y presentan notables propiedades como alta estabilidad y solubilidad, además por su pequeño tamaño pueden penetrar rápidamente dentro de un tejido siendo herramienta eficiente para ciertas terapias. Dada su importancia en área clínica, en este proyecto se propone la producción de un nanocuerpo quimérico que reconoce la proteína L1 del HPV, usando la bacteria Escherichia coli como sistema de expresión para evaluar su construcción y purificación para dirigir la producción en los cloroplastos de Chlamydomonas reinhardtii. Para lograr este objetivo, se insertó el gen que codifica para una proteína recombinante quimérica de fusión, de aproximadamente 45 kDa, en el vector pET28b. La proteína de fusión consistió en el nanocuerpo, dos etiquetas de purificación (NanoTag9 y 6xHis) y una proteína fluorescente señaladora, mCherry. La construcción permitió la expresión del nanocuerpo recombinante en E. coli BL21(DE3) y su purificación usando una columna Ni-NTA. La purificación del nanocuerpo se confirmó con SDS-PAGE correspondiendo con el tamaño de 45 kDa que se esperaba y con western blot usando anticuerpos Anti-His-HRP que reconocen la etiqueta 6xHis comprendida en la proteína recombinante.