Estandarización de las condiciones de cultivo para la obtención, caracterización y diferenciación de células troncales mesenquimales a osteoblastos de pacientes con osteosarcoma

Abstract

RESUMEN: Las células troncales mesenquimales (CTM ó MSCs) son capaces de auto replicarse y diferenciarse hacia una variedad de estirpes celulares incluyendo osteoblastos, condrocitos, adipocitos, células endoteliales, musculares y recientemente descrito, a células neuronales. Por sus características como viabilidad, multipotencialidad, plasticidad y la capacidad de auto renovación, las hace teóricamente la primera elección para el tratamiento de muchas enfermedades, así como en la reparación y regeneración de tejido óseo. Por otro lado, diversos factores de crecimiento potencializan la diferenciación y regeneración ósea in vitro, dentro de los cuales se incluyen: el BMP 7, IGF 1, EGF, FGFb y PE 1. El objetivo del presente estudio fue realizar un análisis comparativo por separado de tres condiciones de cultivo para la proliferación y diferenciación de las células troncales mesenquimales de médula ósea de pacientes con osteosarcoma (CTMMO), hacia osteoblastos con: 1) medio osteogénico, compuesto por ? MEM, dexametasona, b glicerofosfato y SFB al 15%; 2) medio diferenciador, el cual es un medio comercial (NH OsteoDiff Médium, Miltenyi Biotec); y 3) medio osteogénico suplementado por separado, con cada uno de los factores de crecimiento: FGFb, EGF, IGF I, BMP 7 y PE 1. Los experimentos realizados revelaron un mayor efecto en la proliferación y diferenciación con el medio osteogenico adicionado con factores de crecimiento; tal es el caso del medio osteogénico adicionado con EGF (10ng/mL) o la PE 1 (35ng/mL) los cuales mostraron un efecto proliferativo y en presencia del FGFb (5ng/mL), se observó un efecto diferenciador, con un incremento significativo en la actividad de fosfatasa alcalina. Por lo cual, la mejor condición de cultivo para diferenciar las CTMMO hacia osteoblastos es el medio osteogénico suplementado con FGFb.