Abstract:
RESUMEN: Rhizopus stolonifer es un hongo fitopatógeno que causa la pudrición blanda de frutas y vegetales de importancia económica. Para controlar las pudriciones postcosecha se emplean fungicidas químicos sintéticos. Estas medidas empiezan a erradicarse y se abren paso las alternativas naturales como el uso del quitosano. El quitosano presenta potencial para controlar enfermedades postcosecha. El mecanismo de acción de este polímero no está totalmente elucidado. El objetivo del presente trabajo fue estudiar el efecto del quitosano (QT) y el oligoquitosano (OQT) en el crecimiento micelial, la germinación de las esporas y la actividad mitocondrial de
R. stolonifer. Adicionalmente, se pusieron de manifiesto las características de los complejos respiratorios del hongo utilizando cultivos de 12 h de crecimiento. La caracterización de los complejos respiratorios reveló la presencia de la NADH-ubiquinona oxidorreductasa
(complejo I), la citocromo c oxidasa (complejo IV) y la ATP-sintetasa (complejo V) además de la formación de los supercomplejos. La aproximación teórica de la estequiometria de los complejos para la formación de los supercomplejos se asemejó a los ya reportados para otros organismos. Adicionalmente, se determinaron dos vías alternas para la oxidación del NADH, la NADH deshidrogenasa externa y la lanzadera del glicerol 3-fosfato deshidrogenasa. Algunas de las enzimas del ciclo de Krebs fueron analizadas por reacciones directas o acopladas, y solo se detectó actividad para la isocitrato deshidrogenasa y la succinato deshidrogenasa. Se analizó el efecto del QT y el OQT manteniendo las mismas condiciones de cultivo. Los resultados indicaron que el QT de bajo peso molecular y el OQT inhibieron significativamente el crecimiento micelial a las concentraciones probadas (0.5, 1.0 y 2.0 mgmL-1). La máxima inhibición se obtuvo con la
concentración de 2 mgmL-1 y el efecto fue similar con el QT y el OQT. Ambos compuestos incrementaron el consumo de oxígeno con mayor grado para el OQT. Con respecto a la actividad de la citocromo c oxidasa y la ATP-sintetasa, se estimularon al menos 2 veces en
presencia del QT. Los patrones electroforéticos de los complejos mitocondriales de las células tratadas con el QT y el OQT no mostraron diferencia con los no tratados. La microscopia de transmisión de electrones mostró alteraciones en la ultraestructura como engrosamiento de la pared celular y el desprendimiento de la membrana plasmática de la pared celular, así como un aumento en el número de mitocondrias en las esporas cultivadas con el QT. Estos resultados demostraron que el QT y el OQT presentan actividad antifúngica, incrementan el consumo de oxígeno y afectan las actividades de algunas de las enzimas del ciclo de Krebs y de los
complejos respiratorios.
Description:
Tesis (Maestría en Ciencias Quimicobiológicas), Instituto Politécnico Nacional, SEPI, ENCB, 2009, 1 archivo PDF, (76 páginas). tesis.ipn.mx