Evaluación de la replicación viral en células BeWo infectadas con RSV mediante un ensayo de RT-qPCR

Abstract

RESUMEN: El Virus Sincitial Respiratorio (RSV) es uno de los principales agentes causales de infecciones agudas en el tracto respiratorio a nivel mundial. Causando infecciones agudas en el tracto superior en adultos y enfermedad respiratoria aguda baja, incluyendo bronquiolitis y neumonía en los lactantes y niños pequeños. Evidencias sugieren que una infección en la vida temprana causada por este virus, predispone a disfunciones crónicas respiratorias como el asma, posiblemente relacionados con la persistencia del virus en el tracto respiratorio y pulmón, logrando alcanzar sitios extrapulmonares. Tal como se detalla en datos más recientes de modelos animales, se sugiere que la placenta puede ser infectada por RSV proveniente de las vías respiratorias de la madre y así infectar al feto, y establecer una infección persistente. Con base en lo antes mencionado; el presente proyecto tuvo como objetivo establecer la permisividad de una línea celular de coriocarcinoma humano (BeWo) al RSV, empleando ensayos de RT-qPCR. Evaluamos la susceptibilidad de RSV o virus inactivado por calor (Mock) en dos líneas celulares HEp-2 y BeWo mediante la detección de la proteína viral F por inmunofluorescencia, mostrado que las células BeWo son susceptibles al RSV. La permisividad de las células BeWo, fue evaluada a través de genes no estructurales y estructurales (NS2 y L) del RSV en una cinética de 16, 24 y 36 h de mediante RT-PCR punto final y RT-qPCR respectivamente, encontrando que existe replicación viral, con una ligera diferencia en la expresión de NS2 y L a tiempos tardíos de la infección. Por otra parte, con el fin de establecer si la inmunidad juega un papel en la permisividad de la línea celular BeWo, evaluamos por PCR punto final la expresión de RIG-1 y TLR-3 encontrando que parecen tener una expresión diferencial durante la infección con RSV. Por lo tanto, lo anterior nos permite establecer que el modelo celular de placenta humana (BeWo) infectadas con RSV, son permisivas a la infección y ocurren eventos de replicación viral, lo cual nos permite asociar con los estudios realizados entre las infecciones en edades tempranas de la vida con el desarrollo de patologías crónicas (asma), durante la edad infantil. Así mismo que la línea celular BeWo es un buen modelo para el estudio de la transmisión vertical de la infección por RSV.