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Caracterización de la expresión de Defensina Alfa 1 en plaquetas y megacariocitos humanos.

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dc.contributor.author Valle Jiménez, Xareni Raquel
dc.date.accessioned 2020-08-11T21:35:37Z
dc.date.available 2020-08-11T21:35:37Z
dc.date.created 2020-07
dc.date.issued 2020-08-06
dc.identifier.citation Valle Jiménez, Xareni Raquel. (2020). Caracterización de la expresión de Defensina Alfa 1 en plaquetas y megacariocitos humanos (Doctorado en Ciencias en Inmunología). Instituto Politécnico Nacional, Sección de Estudios de Posgrado en Investigación, Escuela Nacional de Ciencias Biológicas, México. es
dc.identifier.uri http://tesis.ipn.mx/handle/123456789/28434
dc.description Tesis (Doctorado en Ciencias en Inmunología), Instituto Politécnico Nacional, SEPI, ENCB, 2020, 1 archivo PDF, (56 páginas). tesis.ipn.mx es
dc.description.abstract RESUMEN: Las plaquetas son células con la capacidad de llevar a cabo diversas funciones en la respuesta inmunológica innata. Diversos estudios han demostrado la capacidad de liberación de proteínas microbicidas plaquetarias (PMP), proteínas derivadas de la estimulación con trombina (tPMP) y péptidos antimicrobianos (AMP), de los cuales sólo se han descrito la defensina beta 1 y catelicidina. Recientemente, los resultados obtenidos a través de un microarreglo de expresión génica realizado para comparar el perfil de RNAs mensajeros entre plaquetas en estado basal y plaquetas activadas por un proceso inflamatorio/infeccioso sugirieron que las plaquetas podrían contener otros péptidos antimicrobianos, como las defensinas de la familia alfa. El objetivo del presente trabajo es el de evaluar y caracterizar la expresión de defensina alfa 1 (DEFA1) en plaquetas y megacariocitos humanos. Los resultados demuestran la presencia del RNA mensajero y la proteína de DEFA1 en plaquetas de sangre periférica y en células Meg-01, línea celular de megacarioblastos humanos. Mediante microscopía confocal y tinciones con anticuerpos dirigidos hacia DEFA1 y Selectina-P, proteína de adhesión que se encuentra en los gránulos alfa de las plaquetas en estado basal, confirmamos que este péptido antimicrobiano se encuentra en los gránulos alfa plaquetarios, mientras que en las células Meg-01 se almacena en los gránulos alfa y citoplasma. Además, a través de ensayos in vitro, utilizando el modelo de partículas tipo plaqueta (PLP) en el cual se induce la maduración de las células Meg-01 mediante la estimulación con trombopoyetina (TPO) y se extraen sus PLPs por centrifugación, observamos que las células Meg-01 pueden transferir el RNA mensajero de DEFA1 a sus PLPs diferenciadas. Así mismo, confirmamos que tanto las plaquetas como las células Meg-01 son capaces de secretar DEFA1 al medio cuando son activadas con sus principales agonistas: trombina, adenosin difosfato (ADP) y lipopolisacárido (LPS), inclusive, los megacariocitos son capaces de secretar DEFA1 durante su proceso de maduración inducido con TPO. Finalmente, se comprobó el potencial antimicrobiano de la defensina secretada por plaquetas, para ello se realizaron cinéticas de actividad microbicida contra Escherichia coli utilizando los sobrenadantes, con o sin DEFA1, de plaquetas que fueron activadas con trombina, donde observamos que al eliminar DEFA1 de todas las proteínas que libera la plaqueta incrementa significativamente la proliferación de las bacterias. En conclusión, tanto plaquetas como megacariocitos humanos son capaces de expresar, almacenar y liberar DEFA1. Este péptido antimicrobiano es secretado en su forma activa y es capaz de llevar a cabo su función biológica antimicrobiana contra bacterias Gram negativas, en específico E. coli. Esto podría ser evidencia de una función desconocida por parte de las plaquetas y megacariocitos en la respuesta inmune innata. ABSTRACT: Platelets are cells with the capacity to execute different functions in the innate immunity response. Diverse studies have demonstrated that platelets can release platelet microbicide proteins (PMP), thrombin-induced platelet microbicide proteins (tPMP) and antimicrobial peptides (AMP), from which only defensin beta 1 and cathelicidin have been described. Recently, the results obtained through a gene expression microarray made to compare the profile of messenger RNAs between platelets at baseline and platelets activated by an inflammatory or infectious stimuli suggested that platelets could contain other antimicrobial peptides, such as defensins of the alpha family. The objective of this work was to evaluate and characterize the expression of defensin alpha 1 (DEFA1) in human platelets and megakaryocytes. The results demonstrate the presence of mRNA and protein of DEFA1 in peripheral blood platelets and in Meg-01 cells, a cell line of human megakaryoblast. By confocal microscopy and staining with antibodies directed towards DEFA1 and Selectin-P, an adhesion protein found in the platelet alpha granules at basal state, we confirm that this antimicrobial peptide colocalize with platelet alpha granules, while in Meg-01 cells is colocalized in their alpha granules and cytoplasm. In addition, through in vitro assays, using the platelet-like particle (PLP) model in which maturation of Meg-01 cells is induced by thrombopoietin (TPO) stimulation and their PLPs are purified by centrifugation, we also observed that Meg-01 cells can transfer the mRNA of DEFA1 to their differentiated PLPs. Likewise, we confirm that both platelets and Meg-01 cells are capable of secreting DEFA1 to the medium when they are activated with their main agonists: thrombin, adenosine diphosphate (ADP) and lipopolysaccharide (LPS), and in addition, megakaryocytes are capable of secreting DEFA1 during their maturation process induced with TPO. Finally, the antimicrobial potential of platelet-secreted defensin was evaluated. For this purpose, the kinetics of the microbicidal activity against Escherichia coli was performed using the supernatants, with or without DEFA1, of platelets that were activated with thrombin. We observed that by eliminating DEFA1 from all the proteins released by the platelets significantly increases the proliferation of bacteria. In conclusion, platelets and human megakaryocytes are able to express, store and release DEFA1. This antimicrobial peptide is secreted in its active form and is capable of carrying out its biological antimicrobial function against Gram-negative bacteria, specifically E. coli. This could be evidence of a previously unknown role for platelets and megakaryocytes in the innate immune response. es
dc.description.sponsorship CONACyT. Laboratorio Nacional de Citometría (LabNalCit). es
dc.language.iso es es
dc.subject Defensina alfa 1 es
dc.subject Megacariocitos es
dc.subject Plaquetas es
dc.subject Péptido antimicrobiano es
dc.title Caracterización de la expresión de Defensina Alfa 1 en plaquetas y megacariocitos humanos. es
dc.contributor.advisor Serafín López, Jeanet
dc.contributor.advisor Aguilar Ruíz, Sergio Roberto


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