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Estudio funcional de las vías primordiales de señalización de Ca2+ vinculadas con la actividad contráctil en aortas sin endotelio de ratas con hipotiroidismo agudo

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dc.contributor.author Duray Zavala, Karen
dc.date.accessioned 2021-02-14T23:47:19Z
dc.date.available 2021-02-14T23:47:19Z
dc.date.created 2019-06-05
dc.date.issued 2021-02-10
dc.identifier.citation Duray Zavala, Karen. (2019). Estudio funcional de las vías primordiales de señalización de CA2+ vinculadas con la actividad contráctil en aortas sin endotelio de ratas con hipotiroidismo agudo. (Maestría en Ciencias en Farmacología). Instituto Politécnico Nacional, Sección de Estudios de Posgrado e Investigación, Escuela Superior de Medicina. México. es
dc.identifier.uri http://tesis.ipn.mx/handle/123456789/28679
dc.description Tesis (Maestría en Ciencias en Farmacología), Instituto Politécnico Nacional, SEPI, ESM, 2019, 1 archivo PDF, (84 páginas). tesis.ipn.mx es
dc.description.abstract RESUMEN: El presente estudio se realizó para investigar la reactividad contráctil de las aortas torácicas de las ratas con hipertiroidismo agudo de 1 a 10 días de evolución. Varios mecanismos involucrados en la activación y mantenimiento de la contractilidad del músculo liso vascular se investigaron. También, la regulación de la expresión de las proteínas PKB/Akt, STIM y Orai en las aortas torácicas se inquirió. Estudios previos han reportado que la T3 a través de mecanismos no genómicos puede provocar depresión del tono vascular, independiente del endotelio, mediada por óxido nítrico (ON). El hipertiroidismo agudo fue inducido en las ratas mediante la administración subcutánea de 3, 5, 3' triiodo-L-tironina (500 μg·kg-1·día-1) por 1 (T31d), 3 (T33d) y 10 días (T310d). Los controles correspondientes recibieron vehículo (solución salina alcalina, s.c.) por 1(V1d), 3(V3d) y 10 días (V10d). El incremento de T3 sérica permitió confirmar el estado hipertiroideo en las ratas. En las aortas sin endotelio de los grupos definidos, se caracterizó la actividad contráctil y la expresión de Akt, p-Akt, STIM1 y Orai1. En comparación con los correspondientes controles temporales, el tratamiento con T3 por 1, 3 y 10 días, disminuyó de manera significativa las respuestas contráctiles provocadas por la fenilefrina en anillos aórticos. Las deprimidas respuestas contráctiles de la fenilefrina obtenidas en tejidos aórticos provenientes de ratas T33d, permanecieron inalteradas en presencia del inhibidor de la síntesis de ON, L-NAME. El tratamiento T33d atenúo las contracciones de la angiotensina II en las aortas. Sin embargo, el tratamiento T33d no influenció las contracciones transitorias de los anillos de aorta ocasionadas por la fenilefrina o cafeína en un medio libre de Ca2+ o las constricciones tónicas subsiguientes producidas por la adición de Ca2+ en ausencia de agonistas. Así, las contracciones inducidas por la liberación de Ca2+ de los almacenes intracelulares y la afluencia de Ca2+ a través de canales operados por reservorio no fueron inhibidas en las aortas. Las contracciones inducidas por el 12-O-tetradecanoilforbol-13-acetato (TPA) en ausencia de Ca2+ extracelular en anillos aórticos permanecieron inalteradas. En esta condición experimental, la constricción del músculo liso aórtico estimulada por TPA ha sido principalmente correlacionada con la amplificación de la sensibilización al Ca2+ mediada por la PKC. Interesantemente, las contracciones provocadas por K+ alto (30 y 80 mM) en anillos aórticos de ratas T33d, se manifestaron significativamente inhibidas. Consecuentemente, la depresión contráctil observada en los tejidos aórticos de ratas con tratamiento a corto plazo in vivo con T3 puede ser explicada, al menos en parte, por la inhibición de canales de Ca2+ operados por voltaje. En los tejidos aórticos, nuestros datos muestran la reducción del cociente p-Akt/Akt, sin modificación de la expresión de Akt total, como evidencia de una disminuida actividad de esta cinasa que aparece únicamente en el décimo día del tratamiento a corto plazo con T3. Asimismo, hubo una inhibición de la expresión de CRAC/Orai y un aumento de la expresión del sensor de Ca2+ STIM-1, solamente en el décimo día de tratamiento. En consecuencia, la depresión contráctil que se manifiesta desde el primer día hasta el décimo, no se correlaciona en el tiempo con las modificaciones moleculares que aparecen únicamente en el día décimo. En conjunto, los resultados sugieren que, en las aortas torácicas sin endotelio de las ratas tratadas a corto plazo in vivo con T3, la hormona inhibe la activación de las contracciones mediadas por los agonistas de receptores acoplados a proteínas G (fenilefrina y angiotensina II) y por K+ elevado que son dependientes, parcial o totalmente, de la entrada de Ca2+ extracelular a través de canales de Ca2+ operados por voltaje. ABSTRACT: The present study was conducted to investigate the contractile reactivity of the thoracic aortas of rats with acute hyperthyroidism from 1 to 10 days of evolution. Several mechanisms involved in the activation and maintenance of vascular smooth muscle contractility were investigated. Also, regulation of the expression of PKB/Akt, STIM and Orai proteins in the thoracic aortas was investigated. Previous studies have reported that T3 through non-genomic mechanisms can cause vascular tone depression induced by nitric oxide (NO), independently of the endothelium. Short-term in vivo hyperthyroidism was established by subcutaneous injections of 3, 5, 3' triiodo-L-tironine (T3; 500 μg·kg-1·día-1) for 1 (T31d), 3 (T33d) and 10 (T310d) days; while control rats received vehicle (alkaline saline solution, sc) for 1 (V1d), 3 (V3d) and 10 (V10d) days. The increase in serum T3 confirmed the hyperthyroid state in the rats. In comparison with the corresponding temporal controls, treatment with T3 for 1, 3 and 10 days, significantly decreased the contractile responses caused by phenylephrine in aortic rings. The depressed contractile responses of phenylephrine obtained in aortic tissues from T33d rats remained unchanged in the presence of the NO synthesis inhibitor, L-NAME. T33d treatment attenuated the contractions of angiotensin II in the aortas. However, T33d did not influence the transient contractions induced in aortic rings by phenylephrine or caffeine in Ca2+-free medium or the subsequent tonic constrictions induced by the addition of Ca2+ in the absence of agonists. Thus, the contractions induced by Ca2+ release from intracellular stores and Ca2+ influx through stored-operated channels were not inhibited in the aortas of T33d rats. The contractions induced by 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA) in the absence of extracellular Ca2+ in aortic rings, remained unchanged. In this experimental condition, the constriction of aortic smooth muscle induced by TPA has been mainly correlated with the amplification of Ca2+ sensitization mediated by PKC. Interestingly, the contractions caused by high K+ (30 and 80 mM) in aortic rings of T33d rats, were significantly inhibited. Consequently, the contractile depression observed in the aortic tissues of rats with short-term in vivo T3 treatment can be explained, at least in part, by the inhibition of voltage-operated Ca2+ channels. In the aortic tissues, our data show the reduction of the p-Akt/Akt ratio, without modification of the total Akt expression, as evidence of a decreased activity of this kinase that appears only on the tenth day of T3 treatment. Likewise, there was an inhibition of CRAC/Orai expression and an increase in the Ca2+ sensor STIM-1 expression, only on the tenth day of T3 treatment. Consequently, the contractile depression that manifests from the first day to the tenth, does not correlate in time with the molecular modifications that appear only on the tenth day. Overall, the results suggest that, in the thoracic aortas without endothelium of short term in vivo T3 treated rats , the hormone inhibits the activation of the contraction mediated by the G-protein coupled receptors agonists (phenylephrine and angiotensin II) and by high K+ that are, partially or totally, dependent on the entry of extracellular Ca2+ through voltage-operated Ca2+ channels. es
dc.description.sponsorship ESM-IPN es
dc.language.iso es es
dc.subject Hipertiroidismo agudo es
dc.subject Actividad contráctil es
dc.title Estudio funcional de las vías primordiales de señalización de Ca2+ vinculadas con la actividad contráctil en aortas sin endotelio de ratas con hipotiroidismo agudo es
dc.type TESIS es
dc.contributor.advisor López Mayorga, Ruth Mery
dc.contributor.advisor Castillo Henkel, Enrique Fernando


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