Modificación genética nuclear de Lactuca sativa transplastómica para la expresión del gen cre que codifica para una recombinasa

Abstract

RESUMEN: La biotecnología molecular de plantas mediante la modificación genética ha permitido la obtención de una gran variedad de proteínas heterólogas con diversas aplicaciones. Las plantas transplastómicas, en las cuales se ha modificado el genoma del cloroplasto, representan una alternativa atractiva a las plantas transgénicas convencionales ya que los cloroplastos no son heredados a través del polen con lo que se reduce el riesgo de dispersión de transgenes. Los vectores empleados para la modificación genética del cloroplasto están constituidos principalmente por los genes de interés y un gen marcador. Este último generalmente confiere resistencia a un antibiótico, lo cual permite seleccionar eficientemente las células transformadas. El uso de este tipo de marcadores de selección genera una preocupación científica y social por lo que es conveniente eliminarlos. Existen diversos sistemas para la eliminación del gen marcador, el más empleado en plantas es el sistema CRE/loxP, que consiste en expresar el gen de un recombinasa desde el genoma nuclear que posteriormente será exportada al cloroplasto, donde reconocerá los sitios loxP que flanquean al marcador de selección, escindiéndolo. El objetivo de este trabajo fue introducir en el núcleo de lechuga transplastómica (que expresa los genes p24 y nef del VIH-1) el gen de una recombinasa para eliminar el gen marcador de selección aadA. Lo cual se pudo verificar en primera instancia por las rondas de selección que sufrieron las plantas y posteriormente con una PCR específica para el gen cre

ABSTRACT: The plants molecular biotechnology through genetic modification has a great variety of heterologous proteins with diverse applications. Transplastomic plants, in which the chloroplast genome has been modified, represent an attractive alternative to transgenic plants, since chloroplasts are not inherited through the soil, which reduces the risk of dispersion of transgenes. The vectors used for the genetic modification of the chloroplast consist mainly of the genes of interest and a marker gene. The latter generally confers resistance to an antibiotic, which allows efficient selection of transformed cells. The use of this type of selection markers is a scientific and social concern for what it is. There are several systems for the elimination of the marker gene, the most used in plants in the CRE / loxP system, which consists in expressing the gene of a recombination from the nuclear genome that was exported to the chloroplast, where it recognizes the loxP sites that flank the marker of selection, splitting it. The objective of this work was to introduce into the nucleus of the transplastomic lettuce (which expresses the genes p24 and nef of HIV-1) the gene of a recombination to eliminate the selection marker gene aadA. What could be verified in the first instance by the rounds of selection suffered by the plants and later with a PCR specific for the gene cre