Clonación y expresión del gen del receptor delta de linfocitos T de Dasypus Novemcinctus

Abstract

ABSTRACT: During the 70s, the armadillo was considered to be the most suitable experimental model to study leprosy. However, its immunological response is scarcely known and T lymphocytes have not been identified and quantified yet in this animal. T lymphocytes with receptor  are considered to be more ancient, from the evolutionary point of view, than T lymphocytes with receptor . This research was aimed at obtaining antibodies able to recognize the delta chain of the receptor  of T lymphocytes from the armadillo encoded by gene dtrdv2. A recombinant protein was obtained from an armadillo DNA sequence that is homologous to the variable region of gene trdv2 that encodes the receptor T of human lymphocytes. The region was amplified through PCR and inserted in the clonation vector pF1K T7 Flexi®. The obtained protein was mixed with complete Freud’s adjuvant and inoculated intraperitoneally into BALB/c mice. The serum from the mice was used to quantify T lymphocytes from the peripheral blood of armadillo with the delta receptor by flow cytometry. We obtained a 319 bp amplicon. The nucleotide and aminoacidic sequences present a homology value of 87% and 56% respectively with the gen trdv2 of human. The recombinant protein has a 12 kDa molecular weight. The mice serum recognized 30 to 35% of the lymphocytes from peripheral blood of Dasypus novemcinctus and only 1% of the human lymphocytes. In conclusion, peripheral blood of the armadillo reveals a subpopulation of lymphocytes with a  chain that is homologous to the TCR of human; this cell population corresponds probably to T lymphocytes.

RESUMEN: Durante los años 1970s, el armadillo se consideró como el modelo experimental más adecuado para el estudio de la lepra. Sin embargo, su respuesta inmunológica es poco conocida y hoy en día aun no se ha podido identificar y cuantificar a los linfocitos T. Los linfocitos T con receptor ??, son considerados más antiguos, desde el punto de vista evolutivo, que los linfocitos T con el receptor ??? Este trabajo tuvo como objetivo la obtención de anticuerpos capaces de reconocer la cadena delta del receptor de linfocitos T del armadillo que se encuentra codificada por el gen dtrdv2. Se obtuvo una proteína recombinante de armadillo la cual es homóloga a la región variable delta 2 de los linfocitos humanos. La región fue amplificada por PCR y se insertó en el vector de clonación pF1K T7 Flexi ®. Se obtuvo un amplicón de 319 pb. Las secuencias nucleótidicas y aminoacídicas presentaron un valor de homología del 87% y 56% respectivamente, en comparación con el trdv2 humano. La proteína recombinante tiene un peso molecular de 12 kDa. Esta fue mezclada con adyuvante completo de Freud y se inoculó por vía intraperitoneal en ratones BALB/c. El suero de los ratones se utilizó para cuantificar los linfocitos T de la sangre periférica de armadillo con el receptor delta por inmunofluorescencia y citometría de flujo. El suero de los ratones reconoció del 30 al 35% de los linfocitos en sangre periférica de Dasypus novemcinctus y sólo el 1% de los linfocitos humanos. En conclusión, la sangre periférica del armadillo revela una subpoblación de linfocitos con una cadena delta similar al TCR ?? humano, lo que probablemente se trate de la población de células T?? del armadillo.