Identificación de los blancos génicos, asociados al factor transcripcional mesenchyme homeobox 2 (meox2) en cáncer pulmonar

Abstract

RESUMEN: Recientemente se ha descrito variación en el número de copias y sobre-expresión del factor transcripcional Meox2 en la progresión neoplásica pulmonar. Sin embargo, actualmente se desconoce la participación de Meox2 en los procesos de transformación y progresión neoplásica pulmonar. La identificación de los posibles blancos génicos transcripcionales de Meox2 en pacientes con cáncer pulmonar, permitirá describir y proponer posibles vías de activación transcripcional orquestadas por Meox2, debido a su alta expresión desde etapas tempranas de la progresión neoplásica pulmonar, posiblemente consolidándose como marcador temprano y/o blanco transcripcional central o terapéutico del cáncer pulmonar. Objetivo: Identificar los posibles blancos génicos, asociados al factor transcripcional Meox2 en cáncer pulmonar. Materiales y métodos: Fueron utilizadas 4 líneas celulares de cáncer pulmonar y 10 muestras de carcinomas pulmonares sólidos, derivadas de pacientes con diagnóstico definitivo de cáncer pulmonar tipo Adenocarcinoma. En ambos casos, tanto líneas celulares como tumores sólidos en fresco fueron derivados de pacientes mestizos mexicanos, bajo atención médica en el INER. A partir de dichas muestras de tejido, se llevó a cabo la técnica de inmunoprecipitación de la cromatina “ChIP-on- chip”. A partir de lo cual aquellos segmentos genéticos inmunoprecipitados (IP) fueron verificados en su calidad del DNA mediante amplificación por PCR de la región promotora del gen GADPH, considerado como gen control. Posteriormente los DNA-IP de pacientes fueron amplificados y re-amplificados mediante métodos WGA1 y WGA3, respectivamente. De este modo, muestras DNA-IP fueron marcadas diferencialmente por fluorescencia e hibridadas en microarreglos de promotores en formato 3X720 NimbleGen-Roche. Posterior a ello, regiones génicas de interés fueron validadas cuantitativamente por PCR en tiempo real. Así como análisis de validación cuantitativa de blancos de Meox2 y su posible asociación a factores de riesgo fueron realizados.

Resultados: Se identificó la presencia del factor transcripcional Meox2 en núcleo tanto en líneas celulares como en carcinomas pulmonares sólidos tipo AD. Meox2 se des- localiza de núcleo en líneas celulares tipo AD, en forma contacto-dependiente en cultivos in vitro.

ABSTRACT: Recently described copy number variation and overexpression of the transcription factor Meox2 in lung cancer progression. However, currently is unknown Meox2 participation in the processes of transformation and human lung tumor progression. The identification of potential target genes for Meox2 as transcriptional factor in lung cancer patients, would describe and propose possible signaling pathways Meox2 orchestrated by transcriptional activation due to its high Meox2 expression since early stages of lung tumor progression, as one possible early gene marker or central transcriptional or as gene target therapy for lung cancer. Objective: Identify potential gene targets, for transcriptional factor Meox2 in lung cancer patients. Materials and methods: Were used 4 lung cancer cell lines and 10 samples of solid lung carcinomas, derived from patients with definite diagnosis of adenocarcinoma type lung cancer. In both cases, solid tumors and cell lines were derived from Mexican mestizian patients under medical care at the INER. From these tissue samples was carried out by the technique of chromatin immunoprecipitation “ChIP-on-chip”. From those gene segments which immunoprecipitates (IP), were tested in DNA quality by PCR assays confirmation based in use of GADPH gene promoter region, considered as gene control. Subsequently, the DNA-IP patients were amplified and re-amplified using both methods WGA3 and WGA1, respectively. Thus DNA-IP samples were labeled by differentially fluorescence and hybridized on microarray format promoters 3X720 NimbleGen-Roche. Following this, probably gene target regions for Meox2 were validated by quantitative real-time PCR. Validation and quantitative analysis for Meox2 gene targets and their possible association with risk factors were performed. Results: We identified the presence of the transcription factor Meox2 in nucleus in both lung cancer cell lines and lung carcinomas solid hitological type AD. Meox2 is moving- out from nucleus in AD type cell lines in contact-dependent manner in vitro cultures.