Bacillus subtilis aplicada en campo como controladora de hongos patógenos de fresa postcosecha

Abstract

RESUMEN: La fresa es propensa a presentar daños en poscosecha principalmente por ataque de hongos que vienen desde el cultivo. Para su control comúnmente se aplican fungicidas químicos desde campo, o métodos de conservación que resultan poco efectivos si la carga microbiana es alta desde el desarrollo del cultivo. En la búsqueda de alternativas más sustentables para el control de hongos, se ha destacado la aplicación de bacterias antagonistas como B. subtilis, que ha demostrado ser efectiva in vitro e in vivo para el control de varios hongos. Sin embargo, el desafío para su efectividad es mayor cuando se enfrenta con biota microbiana y condiciones de campo. Por lo anterior, en este trabajo se evaluó una cepa de B. subtilis (GOS 01 B-67748) aplicada desde campo como controladora de hongos patógenos en fresa en poscosecha. La bacteria se aplicó cada 15 días a 1 x 1012 UFC/ml en hojas y frutos. Se recolectaron frutos al azar 1, 5 y 15 días después de la 1ª aplicación de bacterias a las plantas y este mismo procedimiento se hizo después de la 8a aplicación. Se evaluó incidencia, índice de severidad de daño por hongos, así como deterioro y decaimiento en los frutos colectados y almacenados durante 6 días; también se determinó la densidad bacteriana presente en su superficie y en particular la presencia del género Bacillus. Además, se determinaron los hongos presentes y su frecuencia. Los tratamientos fueron frutos provenientes de plantas tratadas con B. subtilis y frutos de plantas sin bacteria (testigo). Como resultado se obtuvo que los frutos tratados con B. subtilis desde campo presentaron significativamente menor incidencia, severidad de daños por hongos, deterioro y decaimiento con respecto a los frutos testigo. Con el tratamiento de B. subtilis, la severidad, incidencia, deterioro y decaimiento se redujeron hasta un 31.5 %, 73.3 %, 19.8 % y 25.7 % respectivamente después de una aplicación de la bacteria. Después de ocho aplicaciones de la bacteria, la severidad, incidencia, deterioro y decaimiento se redujeron un 58.7 %, 61.5 %, 40.5 % y 43 % respectivamente. El tratamiento influyó significativamente en la reducción de estas variables. Se encontró presencia de colonias del género Bacillus en fresas tratadas con B. subtilis, después de una y ocho aplicaciones en los factores de dilución de 103 y 102 UFC/ml respectivamente. Con una u ocho aplicaciones de B. subtilis en las fresas, se redujo significativamente la presencia de hongos como: Rhizopus stolonifer, Botrytis cinerea, Fusarium oxysporum y Alternaria alternata en las fresas en poscosecha en porcentajes que oscilaron del 40.3 % a 100 %. Aplicar B. subtilis desde campo influyó significativamente en la reducción de estos hongos en poscosecha incluso 15 días después de la aplicación. Se obtuvieron once cepas en los frutos testigo, los cuales se identificaron como: Rhizopus stolonifer, Botrytis cinerea, Fusarium oxysporum, Alternaria alternata, Aspergillus sp., Cladosporium sp., Penicillium pinophilum, Colletotrichum sp., Macrophomina sp., Neopestalotiopsis sp., y Lasiodiplodia sp. En frutos tratados con B. subtilis también se presentó Penicillium pinophilum sin diferencias significativas con respecto a los frutos testigo. Por lo anterior se considera que B. subtilis (GOS 01 B-67748) aplicada desde campo, tiene el potencial de controlar hongos patógenos en fresa en poscosecha.

ABSTRACT: Strawberry is susceptible to post-harvest damage, mainly due to fungal attacks that come from the crop. To control them, chemical fungicides are commonly applied from the field, or conservation methods that are not very effective if the microbial load is high since the development of the crop. In the search for more sustainable alternatives for the control of fungi, the application of antagonistic bacteria such as B. subtilis has been highlighted, which has proven to be effective in vitro and in vivo for the control of various fungi. However, the challenge to its effectiveness is high when faced with microbial biota and field conditions. Therefore, in this work a strain of B. subtilis (GOS 01 B-67748) applied from the field as a controller of postharvest strawberry pathogenic fungi was evaluated. The bacterium was applied every 15 days at 1 x 1012 CFU / ml on leaves and fruits. Fruits were randomly collected 1, 5 and 15 days after the 1st application of bacteria to the plants and this same procedure was carried out at the 8th application. Incidence, severity index of fungal damage, as well as deterioration and decay of the fruits collected and stored for 5 days were evaluated; the bacterial density present on their surface and in particular the presence of the Bacillus genus was also determined. In addition, the fungi present and their frequency were determined. The treatments were fruits from plants treated with B. subtilis and fruits from plants without bacteria (control). As a result, it was obtained that the fruits treated with B. subtilis from the field presented significantly lower incidence, severity of damage by fungi, deterioration and decay compared with the control fruits. With the B. subtilis treatment, the severity, incidence, deterioration and decay were reduced by 31.5 %, 73.3 %, 19.8 % and 25.7 % respectively after one application of the bacteria. After eight applications of the bacteria, the severity, incidence, deterioration and decay were reduced by 58.7 %, 61.5 %, 40.5 % and 43 % respectively. Treatment significantly influenced the reduction of these variables. Bacillus colonies were found in strawberries treated with B. subtilis, after one and eight applications at dilution factors of 103 and 102 CFU / ml respectively. With one or eight applications of B. subtilis in strawberries, the presence of fungi such as: Rhizopus stolonifer, Botrytis cinerea, Fusarium oxysporum and Alternaria alternata in postharvest strawberries was significantly reduced in percentages that ranged from 40.31 % to 100 %. Applying B. subtilis from the field significantly influenced the reduction of these fungi in postharvest even 15 days after application. Eleven strains were obtained in the control fruits, which were identified as: Rhizopus stolonifer, Botrytis cinerea, Fusarium oxysporum, Alternaria alternata, Aspergillus sp., Cladosporium sp., Penicillium pinophilum, Colletotrichum sp., Macrophomina sp., Neopestalotiopsis sp., and Lasiodiplodia sp. In fruits treated with B. subtilis, Penicillium pinophilum also appeared without significant differences with respect to the control fruits. Therefore, it is considered that B. subtilis (GOS 01 B-67748) applied from the field, has the potential to control pathogenic fungi in postharvest strawberry.