RESUMEN: Las RNTs 5’ y 3’ de diversos virus de RNAcs+ se encargan de regular procesos como la traducción y la replicación viral mediante su interacción con proteínas, ya sea de la célula a la que infectan o proteínas propias de cada virus. Esta interacción permite la formación de complejos RNA-proteínas, los cuales permiten a su vez el acercamiento de las RNTs, el cual es indispensable para llevar a cabo los procesos antes mencionados.
Existen antecedentes en numerosos modelos virales donde ya se ha descrito la interacción de las proteínas celulares y/o virales con las RNTs y su participación en el ciclo replicativo de estos virus, es por ello que decidimos analizar si las RNTs de HastV-8 eran capaces de ineraccionar con proteínas provenientes de la línea celular CaCo-2 no infectadas e infectadas. Mediante ensayos de retardamiento observamos que ambas RNTs son capaces de formar complejos diferenciales con extractos totales citoplásmicos no infectados e infectados, de los cuáles solo algunos fueron específicos. Los complejos formados con extractos no infectados mostraron una mejor resolución; sin embargo, los complejos formados con extractos infectados fueron más en número sugiriendo que posiblemente astrovirus requiera más factores virales que celulares. Por otro lado, la proteína PTB recombinante fue capaz de interactuar con ambas RNTs de HastV-8 de forma dosis dependiente, por lo que su participación en la traducción y/o rplicación de HastV-8 se está investigando.
Con los datos obtenidos en este trabajo podemos decir que las RNTs de HastV-8 interaccionan con proteínas virales y celulares, entre ellas PTB. Saber la naturaleza de las proteínas que forman parte de los complejos y el tipo de interacciones que utilizan para unirse al RNA permitiran entender su participación en la regulación de la traducción y la replicación de astrovirus.
ABSTRACT: UTRs 5’ y 3’ of a variety of +ssRNA viruses regulate events like viral translation and replication, through their interaction with host or viral proteins. This interaction allows the formation of RNA-protein complexes, which in turn allows the UTRs approach, which is indispensable to perform the viral translation and replication.
There are references in many viral models that have described the interaction between host and viral factors with UTRs and their role in replicative cicle of those viruses. We decided to analice if HAstV-8 UTRs were capable of interacting with proteins of CaCo-2 cell line non infected and infected.
Through mobility shift assays we saw that both UTRs form different complexes with non infected and infected total citoplasmic extracts, but only some of them were specific. The complexes formed with non infected extracts had a better resolution, however, those formed with infected extracts were more in number suggesting that perhaps HAstV-8 need more viral factors. On the other hand, we showed that recombinant protein PTB interact with both UTRs in a dose dependent manner so their role in HAstV-8 translation and replication is being investigated.
With the information obtained we can say that HAstV-8 UTRs interact with viral and host proteins like PTB. If we know the nature of these proteins and the interaction they use to bind RNA, we will be able to understand their role in regulation of HAstV translation and replication.
