Expresión de una proteína CRY1 de Bacillus thuringiensis en la levadura Yarrowia lipolytica

Abstract

La expresión de proteínas en sistemas eucariotas es una necesidad, las levaduras son los sistemas preferidos por sus propiedades únicas. La levadura Yarrowia lipolytica es muy utilizada, se reportan más de 42 proteínas expresadas/secretadas en Y. lipolytica, su producción a gran escala es muy eficiente, se conoce ampliamente su genética y su genoma. Bacillus thuringiensis es una bacteria con gran interés biotecnológico debido a su acción insecticida, esta propiedad es gracias a las proteínas producidas durante su etapa de esporulación, denominadas proteínas cry, estas últimas han sido expresadas en diferentes sistemas tales como E. coli, así como en plantas, sin embargo, la expresión de las proteínas cry en levaduras es escaso. El trabajo se baso en la clonación de la proteína Cry1Ac así como la toxina de Bacillus thuringiensis en dos vectores de expresión propios para la levadura Y. lipolytica, siendo el vector pRRQ1 de tipo replicativo y el vector comercial pYLEX1 de tipo integrativo, para de esta forma expresar la proteína Cry1. Primeramente se diseñó un par de oligonucleótidos que permitieran recuperar la toxina y el ORF del gen que codifica para la proteína Cry, los cuales se amplificaron por PCR, usando como ADN molde, el ADN plasmídico de B. thuringiensis, el producto se clonó en los vectores de expresión y con ellos, se transformó la cepa receptora Polg de Y. lipolytica.