Efecto del extracto etanólico de hippocratea excelsa en la expresión de COX1 y VEGF para fines gastroprotectores

Abstract

RESUMEN: La úlcera gástrica es un trastorno digestivo frecuente causado por un desequilibrio entre factores agresivos (ácido clorhídrico, pepsinas, radicales libres y oxidantes) y mecanismos defensivos (barrera de la mucosa, bicarbonato, flujo sanguineo de la mucosa, entre otros). El estrés oxidativo, el consumo de alcohol y el uso crónico de medicamentos tales como los antiinflamatorios no esteroideos (AINES) son factores etiológicos revelantes para el desarrollo de úlceras gástricas (Farzaei et al., 2015).

Por lo que el objetivo de este trabajo es evaluar la actividad gastroprotectora de Hippocratea excelsa (cancerina), en un modelo murino in vivo. Se identificaron y cuantificaron los metabolitos secundarios presentes en el extracto etanólico. Se determinó la actividad antioxidante del extracto etanólico con los métodos DPPH y ABTS. Posteriormente se evaluó la actividad gastroprotectora del extracto de Hippocratea excelsa en ratones CD1, donde se utilizaron dosis de 200 y 400 mg/Kg de ratón y de controles se utilizó Ranitidina a 50 mg/kg y Omeprazol a 30 mg/kg de ratón. Se recolectaron las muestras de estómago de los diferentes tratamientos y se cuantificó la presencia de las proteínas (COX-1 y VEGF) con la técnica de Western Blot.

Hippocratea excelsa dio positivo a fenoles, flavonoides, taninos, alcaloides, quinonas, saponinas y esteroides. La cuantificación de metabolitos se expresa por gramo de muestra: fenoles 3.9±0.017 mg eq. de ácido gálico, flavonoides 0.61±0.0009 mg eq. de quercetina, taninos 0.13±0.00056 mg eq. de ácido tánico, alcaloides 18.35±0.037 mg eq. de cafeína, esteroides 4.43±0.073 mg eq. de colesterol. La actividad antioxidante por el método de ABTS y DPPH teniendo un porcentaje mayor al 90 % de inhibición en ambos métodos.

La actividad gastroprotectora de los extractos en modelo in vivo, mostraron la reduccion del indice del daño de la mucosa gástrica de 35 úlceras del control a 5 (Escala de Lacroix & Guillaume, 2008) que corresponde a la dosis de 400 mg/kg de ratón para Hippocratea excelsa.

La inducción por etanol aumenta significativamente la expresión de COX1 debido al efecto supresor del etanol sobre el nivel de PGE2 en la mucosa gástrica, de igual manera el aumento en la expresión de VEGF esta involucrado en la defensa de la mucosa gástrica y la respuesta angiogénica que se produce durante la cicatrizacion.

El rendimiento obtenido fue de 19.54±2.51% para Hippocratea excelsa no obstante los mediadores proinflamatorios como COX-1 (Ciclooxigenasa 1) y el VEGF (Factor de crecimiento endotelial vascular) desempeñan papeles clave en el mantenimiento y la regulación de la úlcera gástrica por lo que su expresión en el tejido del estómago es de suma importancia en la evaluación del daño ocasionado por etanol.

ABSTRACT: Gastric ulcer is a common gastrointestinal disorder caused by an imbalance between aggressive factors (hydrochloric acid, pepsin, free radicals and oxidants) and defensive mechanisms (mucosal barrier, bicarbonate, blood flow mucosa, etc.). Oxidative stress, alcohol and chronic use of drugs such as nonsteroidal antiinflammatory drugs (NSAIDs) are etiological factors for the development of disclosing gastric ulcers (Farzaei et al., 2015).

So the aim of this work is to evaluate the gastroprotective activity of Hippocratea excelsa (cancerina), in a murine model in vivo. They were identified and quantified secondary metabolites present in the ethanolic extract. The antioxidant activity of the ethanolic extract was determined with DPPH and ABTS methods. Subsequently the gastroprotective activity of extract Hippocratea excelsa CD1 mice, where doses of 200 were used and 400 mg / kg of mouse and controls was evaluated Ranitidine was used at 50 mg / kg and Omeprazole 30 mg / kg of mouse. stomach samples of different treatments were collected and the presence of proteins (COX-1 and VEGF) with the Western Blot technique was quantified.

Hippocratea excelsa tested positive phenols, flavonoids, tannins, alkaloids, quinones, saponins and steroids. 3.9 ± 0.017 mg phenols eq: Quantitation of metabolite per gram of sample is expressed. gallic acid, flavonoids 0.61 ± 0.0009 mg eq. quercetin, tannins 0.13 ± 0.00056 mg eq. tannic acid, alkaloids 18.35 ± 0.037 mg eq. caffeine, steroids 4.43 ± 0.073 mg eq. cholesterol. The antioxidant activity by the method of ABTS and DPPH having a percentage higher than 90% inhibition in both methods.

The gastroprotective activity of the extracts in vivo model showed reducing the rate of damage of the gastric mucosa of 35 ulcers contol 5 (Scale Lacroix & Guillaume, 2008) corresponding to 400 mg / kg mouse for Hippocratea excelsa.

Induction by ethanol significantly increases expression of COX1 due to the suppressive effect of ethanol on the level of PGE2 in the gastric mucosa, likewise the increase in the expression of VEGF is involved in the defense of the gastric mucosa and the angiogenic response it occurs during healing.

The yield obtained was 19.54 ± 2.51% for Hippocratea excelsa however proinflammatory mediators such as COX-1 (cyclooxygenase 1) and VEGF (vascular endothelial growth factor) play key roles in the maintenance and regulation of gastric ulcer so its expression in the stomach tissue is of the most importance in the evaluation of the damage caused by ethanol.