ABSTRACT: Testicular development in the human being depends on the early expression of the testicular SRY
gen and its homologue SOX9. The molecular mechanisms that lead to testicular determination are
still under study. XY women have a female phenotype with a 46,XY karyotype and bilateral
streaks. Mutations on SRY lead to the failure of testicular development, however alterations in this
gene are only present in 15% of the patients, and in the rest of the patients the cause is unknown.
Studies in transgenic Wt1 (+/‐) y Sf1 (+/‐) B6XYAKR mice show that a reduction in the expression of
the Wt1, Sf, GATA4 and ZFPM2 genes
decreases the transcription of leading to sexual reversion. The study of functional polymorphisms
in SRY upstream genes (SF1, WT1 y GATA4) could explain the lack of testicular development in
these cases. The purpose of this study is to identify functional SNPs in the SF1, WT1, GATA4 and
ZFPM2 genes in patients with complete gonadal dysgenesis 46, XY without mutation in the SRY
gene.
Eleven patients with DGP 46 XY were included. 1) The patients SRY gene opened lecture frame was
sequenced and amplified. 2) The previously described SNPs in the mentioned genes promoting
region were studied. The polymorphisms analyses was done by real time PCR using TaqMan
probes. 3) A global study was done on the SNPs present in exons, introns and UTRs of the fog2,
GATA4 and WT1 genes by a microarray technique ( 500 SNPs Affymetrix).
From the 11 patients, two (18%) had mutations in the SRY gene and were excluded from the
genotyping study. The polymorphism study of the promoting regions of our study genes
establishes that there is no significant difference between the cases and the controls.
Three polymorphisms were found on the fifth intron of gene ZFPM2 (rs6469015, rs9643020,
rs1442326) and a SNP on intron 10 of the GATA4 (rs2409811) that have statistically significant
differences between the control and the case samples.
The polymorphisms that differ significantly between cases and controls can be related to the
etiology of XY gonadal dysgenesis.
RESUMEN: El desarrollo testicular en el humano depende de la expresión temprana del gen determinante testicular SRY y de su homólogo SOX9. Los mecanismos moleculares que conducen a la determinación testicular aún están en estudio. Las mujeres XY presentan fenotipo femenino con cariotipo 46, XY y estrías bilaterales.. Mutaciones en SRY, conducen a la falla de desarrollo testicular, sin embargo, alteraciones en este gen se presentan únicamente en 15 % de los pacientes, en el resto de los casos se desconoce la causa. Estudios en ratones transgénicos Wt1 (+/?) y Sf1 (+/?) B6XYAKR muestran que la reducción en la expresión de los genes Wt1, Sf, GATA4 y ZFPM2 disminuye la transcripción de SRY lo que conduce a reversión sexual.. El estudio de polimorfismos funcionales en genes río arriba de SRY (SF1, WT1 y GATA4) podrían explicar la falta de desarrollo testicular en estos casos. El objetivo del presente trabajo es identificar SNPs funcionales en los genes SF1, WT1, GATA4 y ZFPM2 en pacientes con disgenesia gonadal completa 46,XY sin mutación en el gen SRY. Se incluyeron 11 pacientes con DGP 46 XY. 1) Se amplificó y secuenció el marco abierto de lectura del gen SRY de los pacientes. 2) Se estudiaron los SNPs previamente descritos en regiones promotoras de los genes antes mencionados. El análisis de los polimorfismos se realizó mediante PCR en tiempo real usando sondas TaqMan. 3) Se realizó un estudio global de los SNPs presentes en intrones, exones y UTR de los genes fog2, GATA4 y WT1 mediante la técnica de microarreglo (500K SNps de Affymetrix). De los 11 pacientes (18%) Dos presentaron mutación en gen SRY por lo que fueron descartados del estudio de genotipificación. El estudio de los polimorfismos de las regiones promotoras de los genes en estudio pone de manifiesto que no existe diferencia significativa entre los casos y controles. Se encontraron tres polimorfismos en el intrón cinco del gen ZFPM2 (rs6469015, rs9643020, rs1442326) y un SNP en el intrón 10 del gen GATA4 (rs2409811) que presentan diferencias estadísticas significativas entre las muestras de los casos y los controles. Los polimorfismos que difieren significativamente entre los casos y los controles pueden estar relacionados con la etiología de las disgenesias gonadales XY.
