RESUMEN: La patogenia de las enfermedades autoinmunes es compleja y los mecanismos que intervienen en su desarrollo son, en su mayoría, desconocidos. La homeostasis inmunológica depende de la interacción entre las señales positivas que inducen activación celular y por lo tanto una respuesta inmune productiva, y las señales negativas que controlan la magnitud de las primeras y que son esenciales para mantener la tolerancia inmunológica y prevenir la autoinmunidad. Las señales negativas van desde los linfocitos T reguladores, la señalización por moléculas de superficie que activan sistemas inhibitorios y las moléculas intracelulares que controlan negativamente la transducción de señales. El lupus eritematoso sistémico (LES) es una enfermedad autoinmune generalizada, que se caracteriza por hiperactividad de linfocitos B y T, aunque la causa de esta alteración no es del todo conocida. En ratones, la inactivación de genes que codifican moléculas implicadas en la homeostasis intracelular de linfocitos B y/o T resulta en un proceso de autoinmunidad muy semejante al LES. En este trabajo se examinó la expresión de genes que codifican moléculas importantes para la homeostasis intracelular en linfocitos de pacientes con LES e individuos sanos. Se estudiaron 17 pacientes del género femenino con LES, clasificadas de acuerdo al grado de actividad (Systemic Lupus Erythematosus Disease Activity Index, SLEDAI). Siete de ellas presentaron LES inactivo y diez tenían diversos grados de actividad de la enfermedad. Se obtuvieron células mononucleares de sangre periférica (CM) por gradientes de Ficoll-Hypaque y se analizaron ya sea en reposo o después de 24 horas de activación con ionomicinaPMA. Se obtuvo el RNA mensajero (poli-A) y se sintetizó cDNA, que se sometió a PCR cuantitativa en tiempo real con un sistema de iniciadores fluorescentes específicos para los siguientes genes: Cbl-b, Csk, NFATc-1, PTP-PEST, SHP-2 y SOCS-1. Se incluyeron IL-2 y b-actina como controles de activación y de expresión constitutiva, respectivamente. Los resultados se examinaron mediante las pruebas de Kruskal-Wallis y U de Mann-Whitney para datos no paramétricos.
ABSTRACT: The pathogenesis of autoimmune diseases is complex and the pathways leading to their development are generally unknown. Immunological homeostasis depends on the interaction of positive signals inducing cellular activation and a productive immune response, and negative signals controling the magnitude of positive signals that are essential to maintain immunological tolerance and to prevent autoimmunity. Negative signals include regulatory T cells, triggering of inhibitory systems by membrane signaling and negative control of transduction signals by intracellular molecules. Systemic lupus erythematosus (SLE) is a systemic autoimmune disease characterized by B and T cell hyperactivity, although the basis for such alteration is unknown. In mice, the inactivation of genes encoding a number of molecules involved in intracellular homeostasis of T and/or B cells results in SLE-like autoimmune diseases. In this work, we examined the expression of genes encoding a set of important molecules for intracellular homeostasis of lymphocytes in SLE patients and healthy individuals. Seventeeen SLE patients, classified by activity index (Systemic Lupus Erythematosus Disease Activity Index, SLEDAI) were studied. Seven were inactive and 10 had different degrees of disease activity. Monocyte-depleted peripheral blood mononuclear cells obtained by Ficoll-Hypaque gradients were activated or not with ionomicin-PMA for 24 hours. From cells were isolate mRNA and cDNA was synthesized and employed in quantitative real time PCR using specific fluorescent primers for the following genes: Cbl-b, Csk, NFATc-1, PTP-PEST, SHP-2 and SOCS1. IL-2 and b-actin were included as activation and constitutive expression controls, respectively. Statistical analysis was performed by the Kruskal-Wallis and U-MannWhitney tests for non parametric data.
