Uso de la RT-PCR en tiempo real para la determinación cualitativa y cuantitativa del virus de hepatitis C

Abstract

RESUMEN: Los virus son los agentes causales de muchos padecimientos humanos y pueden causar enfermedades en diferentes órganos y tejidos del cuerpo; específicamente los que causan inflamación del hígado, mejor conocidos como virus de las hepatitis y que constituyen una familia con una gran variedad de tipos, cada uno con características propias como tamaño, estructura composición, genética y forma de replicación; entre estos virus están los tipos virales A, B, C, D, E y G. Entre estos virus merece especial atención el virus de la hepatitis C (VHC). La infección con el virus de la hepatitis C, a diferencia de los otros tipos virales, causa un número excepcionalmente alto de casos con enfermedad hepática crónica. La infección con VHC con frecuencia no produce síntomas por un período de tiempo relativamente largo, por esta razón, la mayoría de los pacientes no son conocedores de su infección. Se sabe que la terapia es más efectiva en los estadios tempranos de la enfermedad y el único tratamiento probado y efectivo, a la fecha, es el interferón alfa en combinación con la Ribavirina. Sin embargo, no todos los pacientes con hepatitis C crónica responden a la terapia, bajo estas circunstancias, el tratamiento además de costoso para el paciente, puede causar serios efectos secundarios como el debilitamiento del sistema inmune. La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) ha permitido la detección ácidos nucleicos a partir de sólo una copia de una secuencia particular, que puede ser específicamente amplificada y detectada guardando una relación cuantitativa entre la cantidad inicial de secuencia blanco y la cantidad del producto por PCR. Aunado a lo anterior, los avances tecnológicos y la incorporación de un sistema de detección de productos de PCR conforme estos se acumulan, resulta en lo que se conoce como PCR en tiempo real; el cual presenta características que lo hacen un método único: la inclusión de sondas fluorogénicas, un ciclador térmico, una fuente de luz ultravioleta y un detector de la fluorescencia, controlados por una computadora; eliminan la variabilidad tradicionalmente asociada con la PCR cuantitativa, permitiendo la cuantificación de productos de PCR de forma de precisa y confiable.

ABSTRACT: Viruses are the cause of human sufferings and they may cause diseases in different organs and body tissues, specifically those that cause liver inflammation, best known as hepatitis viruses, and constitute a group with a variety of types each one with its own characteristics as size, structure, composition, genetics and replication mode; among this viruses are the viral type: A, B, C, D, E and G. Hepatitis C Viruses (HCV), among viral type viruses, requires special attention. Different from other viral type infections caused by the hepatitis C virus causes a great number of chronic liver diseases. Patients with HCV infection frequently do not have any symptoms for a relatively long term, for this reason, the majority of patients is not aware of the infection. In the other hand, therapy is more effective during the first stages of the disease, and up to this date the only tried and effective treatment is alpha-Interferon combined with Ribavirina. However, not all patients with chronic hepatitis C respond to such therapy, under those circumstances, treatment, besides expensive for the patient, may cause secondary side effects as debilitation of immune system. The PCR or Polymerase Chain Reaction (PCR) has permitted detection of nucleic acids from a single copy of a particular sequence; this can be specifically amplified and detected with a quantitative relationship between the starting target amount sequence and the amount of the PCR product. Moreover, technological advances and incorporation of PCR products detection system while those are accumulate, results in Real Time PCR, which one has characteristics that make it a unique method: fluorogenic probes inclusion, a thermal cycler, ultraviolet light and a fluorescent detector controlled by computer, eliminate the variability traditionally associated with quantitative PCR, thus allowing the precise and reliable quantification of PCR products.