Identificación por técnicas de biología molecular de Morbilivirus en lobos marinos (Zalophus Californianus) del Golfo de California

Abstract

RESUMEN: Los morbilivirus son patógenos altamente contagiosos que causan algunas de las enfermedades virales más devastadoras en humanos y en otros animales alrededor del mundo. A lo largo de la década de los años 90 y hasta la actualidad, el morbilivirus de los cetáceos y pinnípedos ha emergido como el patógeno de mayor importancia en mamíferos marinos salvajes, causando grandes epizootias en los océanos Atlántico, Pacífico y Mar Mediterráneo. Los lobos marinos de california (Zalophus californianus) se han identificado como especie modelo para investigación de los efectos contaminantes ambientales en mamíferos marinos y en ecosistemas, por lo cual mediante técnicas de biología molecular se puede identificar y caracterizar el morbilivirus presente en estos mamíferos marinos para implementar una vigilancia epidemiológica en este ecosistema y poder proteger a otras especies susceptibles, algunas endémicas de la región y/o en peligro de extinción. Se tomaron hisopados oro-faríngeos en cinco loberas en el 2008 y en seis en el 2009 en las Islas del Golfo de California de diez cachorros aparentemente sanos en cada lobera. También se tomaron muestras de tejidos de tres lobos marinos y dos delfines de Risso (Grampus griseus) varados en las costas de Mazatlán Sinaloa en enero y febrero de 2009. Se diseñaron iniciadores específicos para amplificar por RT-PCR un fragmento de 217 pb del gen N de los morbilivirus que afectan mamíferos marinos, se determinó el límite de detección para evaluar la sensibilidad, la cual fue de 0.01 fg de RNA viral/µl, que equivale a 1.19 copias de genoma. 13 muestras del 2008 resultaron positivas (prevalencia = 26%) y 8 del 2009 (prevalencia = 13.3%). De las muestras de la contingencia, un lobo marino y los dos delfines de Risso resultaron positivos, observando una prevalencia de 60%. Se seleccionaron productos de PCR positivos de muestras representativas y se enviaron a secuenciar. En el análisis filogenético se observó que todas las secuencias obtenidas tienen alta similitud entre ellas y se relacionan a CDV que afecta a mamíferos marinos. Por la alta prevalencia observada y la ausencia de aparente enfermedad en los animales se sospecha que el morbilivirus puede ser endémico en los lobos marinos del Golfo de California.

ABSTRACT: Morbilliviruses are highly contagious pathogens that cause some of the most devastating viral diseases in humans and other animals around the world. Since the decade of the 90s, the morbillivirus of cetaceans and pinnipeds has emerged as the most important pathogen in wild marine mammals, causing major epidemics in the Atlantic and Pacific Oceans and the Mediterranean Sea. California sea lions (Zalophus californianus) have been identified as a model species for research on environmental pollution effects on marine mammals and ecosystems; molecular biology techniques can be used to identify and characterize the morbillivirus present in these marine mammals to implement an epidemiological surveillance on the ecosystem to protect susceptible wildlife species, some of them endemic and/or endangered on the region. Oro-pharyngeal swabs were taken in five sea lion colonies in 2008 and in six colonies in 2009 in the Gulf of California Islands, ten apparently healthy pups were sampled in each rookery. Tissue samples were also taken from three sea lions and two Risso's dolphins (Grampus griseus) stranded on the coasts of Mazatlan Sinaloa in January and February 2009. Specific primers were designed to amplify by RT-PCR a 217 bp fragment of the N gene of the morbilliviruses that affect marine mammals; the detection limit was determined to estimate the sensitivity of the technique, which resulted on 0.01 fg or viral RNA/µl, equivalent to 1.19 genome copies. 13 samples of 2008 were positive (prevalence = 26%) and 8 of 2009 (prevalence = 13.3%). Of the samples of the contingency, one sea lion and two Risso's dolphins were positive, having a prevalence of 60%. Representative positive samples were selected to purify each RT-PCR product and were sequenced and analyzed. The phylogenetic analysis showed that all obtained sequences have high similarity between them and that are closely related to canine distemper viruses that affects marine mammals. Because of the high prevalence observed and no apparent sick animals, morbillivirus is suspected to be an endemic disease of sea lions in the Gulf of California.