Identificación de secuencias del virus de papiloma humano en cáncer de mama ductal infiltrante

Abstract

RESUMEN: INTRODUCCION: El cáncer de mama es una de las enfermedades que más prevalece a nivel mundial, en nuestro país es la segunda causa de muerte por cáncer en las mujeres entre los 40-60 años (1,2). La sospecha de que el Virus del papiloma humano (VPH) tiene una relación con el cáncer de mama se debe a la identificación de los VPH 16 y 18 en la inmortalización del epitelio normal de la mama, y en células de cáncer de mama se han detectado los tipos 16, 33, 11, y 18 en mujeres de diferentes latitudes 3,4 OBJETIVO: Identificar secuencias del virus del papiloma humano en tejidos de cáncer de mama ductal infiltrante. MATERIAL Y MÉTODOS: Se analizaron 108 bloques de tejido incluidos en parafina con diagnóstico de cáncer de mama ductal infiltrante (CMDI) obtenidos del Hospital ISSSTEP (período 2002 -2007). Se realizó la extracción de ADN y la detección de VPH mediante la técnica de PCR en el CMN SXXI (Mayo-Septiembre de 2008), se emplearon los oligonucleótidos Gp5/6 (que detectan más de 15 tipos virales) y VPH/E6. El control de amplificación interno fue un fragmento de la región D-loop/ADN mitocondrial (fragmento de 145 pares de bases). RESULTADOS: La calidad del ADN purificado fue probado mediante la amplificación del ADN mitocondrial. Asimismo, la sensibilidad del método para amplificar el ADN viral fue de aproximadamente. 2 copias de ADN viral/célula. De los 108 tejidos incluidos en parafina analizados, no se encontró evidencia de la presencia de VPH. DISCUSIÓN: La detección de las secuencias del VPH depende en gran medida de la sensibilidad y tipo de método usado, lo que genera muchas veces resultados controversiales. En este estudio se procesaron las muestras por el método de PCR, asimismo, la sensibilidad del método para amplificar el ADN viral fue de aproximadamente 2 copias de ADN viral/célula, tal como se ha reportado en diversos trabajos y que han sido validados y aprobados en nuestro laboratorio en estudios previos reportados. Además se consideraron los bloques que contuvieran más del 80% de células tumorales y que tuvieran la máxima posibilidad de detección de los virus. Se usó como control positivo línea celular SiHa, garantizando con ello la máxima sensibilidad de nuestro método que de existir copias de ADN viral de VPH-16 en nuestros tejidos fueran detectadas. CONCLUSIÓN: Los resultados muestran que la población mestiza mexicana estudiada afectada por CMDI, no tiene evidencia de infección viral. Aunque la relación de VPH y cáncer de mama es aún controversial, no se descartaría la presencia de estos virus en otras entidades patológicas de la mama (por ejemplo las lesiones condilomatosas).

ABSTRACT: INTRODUCTION: The breast cancer is one of the diseases that prevail more at world-wide level, in our country is the first cause of death by cancer in women between 40-60 years old 1,2. The suspicion that the human papilloma virus (HPV) has a relation with the breast cancer is due to the identification of HPV 16 and 18 in the immortalization of normal ephitelium of the breast, and in cells of breast cancer types 16, 33, 11, and 18 in women of different latitudes have been detected. 3,4 OBJECTIVE: To identify sequences of the human papilloma virus in tissues of infiltrating ductal breast cancer. MATERIAL AND METHODS: 108 blocks of tissues included in paraffin were analyzed with diagnosis of cancer of infiltrating ductal breast cancer (IDBC) obtained from the Hospital ISSSTEP (period 2002 -2007). The DNA extraction was realized and the detection of HPV by means of the technique of PCR in the CENTRO MEDICO SIGLO XXI (May-September of 2008), oligonucleotides Gp5/6 were used (that detects more than 15 viral types) and HPV/E6. The control of internal amplification was a fragment of the mitochondrial D-loop/DNA region (fragment of 145 pairs of bases). RESULTS: The quality of the purified DNA was proven by means of the amplification of the mitochondrial DNA. Also, the sensitivity of the method to amplify the viral DNA was of approximately 2 DNA copies viral /cell. From the 108 tissues included in paraffin and analyzed, was not evidence of the HPV presence. DISCUSSION: The detection of the sequences of the HPV to a great extent depends on the sensitivity and type of used method, which often generates controversial results. In this study the samples were processed as it has been reported in diverse works and they have been validated and approved in our laboratory in reported previous studies. In addition the blocks were considered that contained more of 80% of tumorals cells and that had the maximum possibility of detection of the virus. Cellular line SIHA was used like positive control. CONCLUSION: The results show that the studied Mexican racially mixed population affected by infiltrating ductal breast cancer , does not have evidence of viral infection. Although the relation of HPV and breast cancer is still controversial, would not discard the presence of these virus in other pathological entities of the breast (for example the condylomatosas injuries).